Razlika između izravne i neizravne imunofluorescencije

ključna razlika Između izravne i neizravne imunofluorescencije je da izravna imunofluorescencija koristi jedno antitijelo koje djeluje protiv ciljanog interesa dok indirektna imunofluorescencija koristi dva protutijela za označavanje cilja od interesa.

Imunofluorescencija ili stanično snimanje je tehnika koja se koristi za označavanje specifičnog ciljnog antigena fluoroforom. Ovdje je fluorofor fluorescentni kemijski spoj koji može ponovo emitirati svjetlost nakon pobuđivanja svjetlosti. Kad se fluorofor veže s ciljanim antigenom, omogućava detekciju ciljne molekule u uzorku. Da bismo ga dalje opisali, kada se antigen veže sa specifičnim antitijelom, može se konjugirati s fluoroforima. Stoga je lako uočiti prisutnost ciljnog antigena u uzorku kada se promatra pod fluorescentnim mikroskopom.

Osim toga, postoje dvije vrste imunofluorescencije; izravna i neizravna imunofluorescencija. Razlika između izravne i neizravne imunofluorescencije uglavnom leži u broju korištenih protutijela i konjugaciji fluorofora. To jest, u izravnoj imunofluorescenciji, fluorofor se direktno veže s primarnim antitijelom, dok se u indirektnoj imunofluorescenciji, fluoroforni konjugat sa sekundarnim antitijelom.

SADRŽAJ

1. Pregled i ključne razlike
2. Što je izravna imunofluorescencija
3. Što je neizravna imunofluorescencija
4. Sličnosti između izravne i neizravne imunofluorescencije
5. Usporedna usporedba - Izravna i neizravna imunofluorescencija u tabelarnom obliku
6. Sažetak

Što je izravna imunofluorescencija?

Imunofluorescencija koristi antitijela za otkrivanje specifičnih ciljnih antigena. Izravna imunofluorescencija je jedna od dvije vrste imunofluorescencije. U izravnoj imunofluorescenciji uključuje jedno protutijelo (primarno antitijelo), a fluorofor se direktno konjugira s primarnim antitijelom. Nakon vezanja antitijela s ciljanim antigenom, fluorofor otpušta fluorescenciju koja se može otkriti fluorescentnim mikroskopom.

Slika 01: Izravna imunofluorescencija

Međutim, izravna imunofluorescencija je skupa metoda jer su primarna konjugirana antitijela skupa u usporedbi s sekundarnim antitijelima. Unatoč tome, to ne uključuje dodatni korak stoga, kraću tehniku. Nadalje, nespecifične veze su smanjene u izravnoj imunofluorescenciji. Dakle, unakrsna reaktivnost vrsta je niska. No u otkrivanju je osjetljivost izravne imunofluorescencije slaba u usporedbi s neizravnom imunofluorescencijom .

Što je neizravna imunofluorescencija?

Indirektna imunofluorescencija je drugi tip imunofluorescencije koji uključuje dvije vrste protutijela kao što su primarna i sekundarna antitijela u označavanju ciljnog antigena. U ovoj metodi, fluorofor se konjugira sa sekundarnim antitijelom. Stoga ova tehnika uključuje dodatni korak.

Slika 02: Imunofluorescencija

Međutim, kod ove metode je osjetljivost velika jer se nekoliko fluorofora može konjugirati na sekundarna antitijela i to otkrivanje olakšava. Nadalje, neizravna imunofluorescencija je jeftinija zbog činjenice da je konjugacija sekundarnih antitijela jeftinija i lakša. U usporedbi s izravnom imunofluorescencijom, unakrsna reaktivnost vrsta je visoka kod neizravne metode.

Koje su sličnosti između izravne i neizravne imunofluorescencije?

• Dvije su vrste imunofluorescentne tehnike.
• Primarna antitijela i fluorofor uključuju obje metode.
• Također, reakcija antigen-antitijelo se događa u obje metode.
• Nadalje, i izravna i neizravna imunofluorescencija koriste fluorescentni mikroskop za otkrivanje antigena.

Koja je razlika između izravne i neizravne imunofluorescencije?

Imunofluorescencija može biti izravna ili neizravna zasnovana na konjugaciji fluorofora s korištenim antitijelima. U izravnoj imunofluorescenciji, fluorofor se konjugira s primarnim antitijelom, što je jedinstveno antitijelo koje uključuje ovu tehniku. Suprotno tome, u indirektnoj imunofluorescenciji, fluorofor se konjugira sa sekundarnim antitijelom, što je jedno od dva tipa protutijela koja su uključena u tehniku. Dakle, glavna razlika između izravne i neizravne imunofluorescencije je vrsta antitijela koje se spaja s fluoroforom.

Sljedeća infografska slika pruža uporednu razliku razlike između izravne i neizravne imunofluorescencije.

Sažetak - Izravna i neizravna imunofluorescencija

Imunofluorescencija je tehnika koja se koristi za otkrivanje prisutnosti specifičnih antigena u uzorku. Ova tehnika koristi specifična antitijela. Zbog toga se antitijela konjugiraju s fluoroforom kako bi ih se detektiralo pomoću fluorescentnog mikroskopa. Nadalje, postoje dvije vrste imunofluorescencije, naime, izravna i neizravna imunofluorescencija. Izravna imunofluorescencija uključuje jedno protutijelo i fluorofor direktno konjugiran na to antitijelo. Neizravna imunofluorescencija uključuje dva antitijela; primarni i sekundarni i fluorofor konjugirani na sekundarno antitijelo. Budući da se nekoliko sekundarnih antitijela može vezati s primarnim antitijelom, a nekoliko fluorofora može konjugirati s sekundarnim antitijelima, neizravna imunofluorescencija je osjetljivija metoda od izravne metode. Nadalje, neizravna je metoda jeftinija od izravne metode. Dakle, ovo je razlika između izravne i neizravne imunofluorescencije.

Referenca:

1. „imunofluorescencija.” Wikipedia, Zaklada Wikimedia, 19. kolovoza 2018. Dostupno ovdje 

Ljubaznošću slike:

1. "HSP IF IgA" Emmanuelm s en.wikipedia, (CC BY 3.0) putem Commons Wikimedia
2. "Imunofluorescencija" Westhayl618 - Vlastito djelo, (CC BY-SA 4.0) preko Commons Wikimedia