Razlika između GFP-a i EGFP-a

ključna razlika Između GFP-a i EGFP-a je da GFP je protein divljeg tipa koji je ugrađen u molekularno kloniranje stanica sisavaca dok je EGFP poboljšani ili dizajnirani tip GFP-a koji se može koristiti na sisavskim stanicama.

Molekularno kloniranje napredna je tehnika koju znanstvenici neizmjerno koriste u ekspresiji proteina pomoću rekombinantne tehnologije. U tehnologiji rekombinantne DNA, potrebno je uspješno transformirati rekombinantni vektor da bi se domaćin organizam. Stoga bi se tijekom procesa transformacije trebalo identificirati i potvrditi je li gen koji zanima transformiran ili ne u domaćina. Da bi to procijenili, molekularni biolozi usvajaju nekoliko tehnika. Od tih tehnika, jedan je reporterski gen. Ovi reporterski geni djeluju kao markeri za biranje ispravnih transformatora. Dakle, Green Fluorescent Protein (GFP) i Enhanced Green Fluorescent Protein (EGFP) su dva reporterska proteina koja se koriste u molekularnom kloniranju.

SADRŽAJ

1. Pregled i ključne razlike
2. Što je GFP
3. Što je EGFP
4. Sličnosti između GFP-a i EGFP-a
5. Usporedna usporedba - GFP vs EGFP u tabelarnom obliku
6. Sažetak

Što je GFP?

GFP je protein divljeg tipa koji sadrži 238 aminokiselinskih ostataka i nekoliko odabranih područja aminokiselinskih sekvenci koje ga razlikuju od ostalih fluorescentnih proteina. Nadalje, ovaj divlji protein bio je u izolaciji od Aequorea Victoria; vrsta meduze. Međutim, u prirodnim pojavama, meduze su mogle proizvesti fluorescenciju zelene boje kao odgovor na određene podražaje.

Ranije je ovaj koncept iznenadio znanstvenike i oni su ga odlučili koristiti na svojim rekombinantnim DNK tehnologijama. Slijedom toga, znanstvenici su koristili ovaj mutirani oblik divljeg tipa kao reporterski gen u svojim studijama genske ekspresije. GFP divljeg tipa može proizvesti protein koji daje fluorescenciju na sobnoj temperaturi ili pod UV svjetlom. Stoga se, kada se umetne u transformatore, izražava i stvara fluorescenciju. Ako fluorescencija nastane nakon procesa transformacije, to potvrđuje uspjeh procesa transformacije. Jednostavnim riječima, fluorescentna emisija signalizira uspješnu transformaciju vektora koji nosi gen koji zanima u domaćina.

Slika 01: GFP

Zbog toga je GFP aktivan kao in vivo marker ekspresije gena. Trenutno se tehnike genetskog inženjeringa koriste za proizvodnju GFP-a. Također su dostupne mnoge poboljšane verzije GFP-a, kao što je EGFP. Stoga ovo omogućava učinkovitu upotrebu GFP-a u studijama molekularnog kloniranja i ekspresije gena.

Što je EGFP?

Pojačani zeleni fluorescentni protein ili EGFP poboljšana je verzija GFP-a. Jednostavnim riječima, EGFP možemo definirati kao izvedenu inačicu divljih vrsta GFP-a. Kad divlji tip gena GFP-a mutira, on proizvodi blagotvorne učinke. Dakle, mutirani gen GFP-a omogućava ekspresiju novih znakova, pa kao rezultat toga možemo proizvesti poboljšani GFP s poboljšanim karakteristikama. Nadalje, možemo uspješno uvesti mutacije u divlji tip GFP gena zračenjem ili kemijskim metodama. Ti mutirani geni tada proizvode EGFP koji ima korisnija svojstva.

Slika 02: EGFP

Poboljšane karakteristike EGFP-a su kako slijedi;

• Sposobna je emitirati jače fluorescentne signale.
• Ima visoku osjetljivost.
• Može se koristiti na sisavskim stanicama umjesto prokariota i drugih eukariota niže razine.
• Također, osigurava povećanu čistoću proizvoda.

Stoga je u usporedbi s GFP-om, ispitivanje genske ekspresije preferirani izbor za EGFP. Međutim, proizvod je skuplji u odnosu na GFP.

Koje su sličnosti između GFP-a i EGFP-a?

• GFP i EGFP su dva proteina koja imaju sposobnost emitiranja zelene boje
• Zbog toga oboje djeluju kao reporterski proteini u studijama ekspresije gena.
• Također je moguće i sintetizirati oboje pomoću rekombinantne DNA tehnologije.
• Nadalje, lako je daljnje mutiranje ove dvije vrste sintetizirati poboljšane oblike.

Koja je razlika između GFP-a i EGFP-a?

Reporterski gen je gen koji se povezuje s interesnim genom za rekombinantnu DNK tehnologiju. To signalizira uspješnu transformaciju rekombinantnog vektora u domaćina. Ovdje su GFP i EGFP dvije vrste zelenih florescentnih proteina koji djeluju kao reporterski proteini. Međutim, ključna razlika između GFP-a i EGFP-a je u tome što je GFP divljeg tipa dok je EGFP projektirana verzija GFP-a. Nadalje, EGFP ima korisnije karakteristike od GFP-a. Na primjer, EGFP proizvodi jaču fluorescentnu svjetlost i osjetljiviji je od GFP-a. Druga razlika između GFP i EGFP su sustavi u kojima ih možemo koristiti. Sustavi koji nisu sisavci koriste GFP dok sustavi sisavaca koriste EGFP.

Podaci u nastavku prikazuju razliku između GFP i EGFP u tabelarnom obliku.

Sažetak - GFP vs EGFP

GFP i EGFP su reporterski proteini u studijama molekularnog kloniranja i ekspresije gena. GFP je protein divljeg tipa, koji je zeleni fluorescentni protein. Protein je u početku bio izoliran od meduze Aequorea victoria. Suprotno tome, EFGP je pojačani oblik proteina GFP. To je mutant divljeg tipa s poboljšanim karakteristikama. Dakle, EFGP ima veću jačinu signala i veću osjetljivost. Stoga ga možemo koristiti na vektorima sisavaca. Suprotno tome, upotreba GFP-a uglavnom je samo na vektorima koji nisu sisavci. Ovo je razlika između GFP-a i EGFP-a.

Referenca:

1.Cinelli, RA i sur. „Pojačani zeleni fluorescentni protein kao alat za analizu dinamike i lokalizacije proteina: Studija lokalne fluorescencije na razini jedno-molekule.“ Fotokemija i fotobiologija., Američka nacionalna medicinska knjižnica, lipanj 2000. Dostupno ovdje  
2. "PDB101: Molekula mjeseca: Zeleni fluorescentni protein (GFP)." RCSB: PDB-101. Dostupno ovdje

Ljubaznošću slike:

1. ”GFP fluorescentni proteinski film” Erin Rod - Vlastito djelo, (CC BY-SA 4.0) preko Commons Wikimedia 
2. ”CA2 amigo2 eGFP miš” Dudek, Serena; Curuana, Douglas; Carstens, Kelly - Vlastiti rad, (CC BY-SA 3.0) putem Commons Wikimedia