Razlika između imunofluorescencije i imunohistokemije

Ključna razlika - Imunofluorescencija u odnosu na imunohistokemiju
 

Dijagnostika bolesti, koja koristi molekularno-biološke metode, postala je novo područje tehnologije kliničkih laboratorija. To uključuje sve testove i metode za prepoznavanje bolesti i razumijevanje uzroka bolesti analizom DNA, RNA ili eksprimiranih proteina u organizmu. Brz napredak u molekularnoj dijagnostici omogućio je osnovna istraživanja zaraznih i nezaraznih bolesti. Oni se koriste za određivanje promjena u slijedu ili razini ekspresije u ključnim genima ili proteinima koji su uključeni u bolest. Imunofluorescencija (IF) i imunohistokemija (IHC) dvije su tako široko korištene tehnike u biologiji raka. IF je vrsta IHC-a gdje se koristi metoda detekcije fluorescencije za analizu monoklonskih i poliklonalnih antitijela, dok IHC koristi kemijske metode za otkrivanje monoklonskih i poliklonalnih antitijela. Ovo je ključna razlika između IF i IHC.

SADRŽAJ

1. Pregled i ključne razlike
2. Što je imunofluorescencija 
3. Što je imunohistokemija
4. Sličnosti između imunofluorescencije i imunohistokemije
5. Usporedna usporedba - Imunofluorescencija prema imunohistokemiji u tabličnom obliku
6. Sažetak

Što je imunofluorescencija (IF)?

Imunofluorescencija je tehnika detekcije u kojoj su antitijela korištena u testu označena upotrebom fluorescentnih boja ili fluorescentnih proteina u svrhu otkrivanja. Označena sekundarna antitijela mogu rezultirati neželjenim pozadinskim signalima; stoga se IF tehnika temelji na obilježavanju samog primarnog antitijela trenutno kako bi se izbjegli neželjeni signali tijekom detekcije. Ovom tehnikom sprječava se nespecifično vezanje između primarnog i sekundarnog antitijela i ono je brže jer ne postoji sekundarni korak inkubacije. Kvaliteta podataka je također poboljšana.

Slika 01: Dvostruko imunofluorescentno bojenje za BrdU, NeuN i GFAP

Fluorohromi ili fluorescentna bojila su spojevi koji mogu apsorbirati zračenje, poželjno ultra ljubičasto zračenje. Kad čestice dođu u osnovno stanje iz pobuđenog stanja, one zrače zračenjem koje detektor hvata i detektira u obliku spektra. Od velike je važnosti da je fluorescentna naljepnica kompatibilna i stabilna za određenu reakciju i da je treba pravilno konjugirati s antitijelom kako bi se dobili točni rezultati. Jedan od najčešće korištenih fluorokroma je fluoresceinski izotiocijanat (FITC), koji je zelene boje, s maksimalnim valnim duljinama apsorpcije i emisije od 490 nm, odnosno 520 nm. Rodamin, drugo sredstvo koje se koristi u IF-u, je crvene boje i ima izražene apsorpcijske i emisijske vršne valne dužine od 553 nm i 627 nm.

Što je imunohistokemija (IHC)?

IHC je molekularna metoda ispitivanja koja se primjenjuje da bi se identificirala i potvrdila prisutnost antigena u ciljanoj stanici. Ciljna stanica mogla bi biti infektivna čestica, mikrobni patogen ili maligna tumorska stanica. IHC koristi monoklonska i poliklonska antitijela da bi odredio prisutnost antigena prisutnih na staničnoj površini ciljnih stanica. Tehnika se temelji na vezanju antigen-antitijelo. Detekcijski marker konjugiran je s tim antitijelima u cilju detekcije prisutnosti ili odsutnosti određenog antigena. Ti markeri mogu biti kemijski markeri kao što su enzimi, fluorescentno obilježena antitijela ili radio-obilježena antitijela.

Slika 02: kriška miša i mozga obojena imunohistokemijom

Najpopularnija primjena IHC-a je u biologiji ćelija raka za prepoznavanje prisutnosti zloćudnih tumora, ali se također koristi za otkrivanje zaraznih bolesti..

Koje su sličnosti između imunofluorescencije i imunohistokemije?

• Imunofluorescencija i imunohistokemija odvijaju se u in vitro uvjetima.
• Obje tehnike se temelje na antigen-antitijelo
• Oboje su vrlo brze tehnike.
• Rezultati tehnika mogu se obnoviti.
• Oboje su poboljšali kvalitetu podataka.
• Ove se tehnike koriste u dijagnostici za rak i zarazne bolesti.

Koja je razlika između imunofluorescencije i imunohistokemije?

Imunofluorescencija vs imunohistokemija
IF je tehnika otkrivanja u kojoj se antitijela koja se koriste u testu obilježavaju pomoću fluorescentnih boja ili fluorescentnih proteina za detekciju.	IHC je tehnika otkrivanja u kojoj su protutijela koja se koriste u testu obilježena upotrebom kemikalija ili radioaktivnih elemenata za detekciju.
Točnost
Točnost je veća u IF tehnici u odnosu na IHC.	Točnost je niža u IHC-u.
Specifičnost
AKO je specifičniji.	IHC je manje specifičan.

Sažetak - Imunofluorescencija u odnosu na imunohistokemiju

Molekularni mehanizmi doveli su do mnogih promjena u području medicine, što je dovelo do naprednih metoda molekularnog ispitivanja koje su donijele revolucije na polju dijagnostike. Ovi izumi doveli su do brze i točne identifikacije i potvrde bolesti, omogućavajući na taj način uspješnu primjenu i proizvodnju lijekova. Ove se tehnike koriste i u farmakologiji kako bi se pronašle ciljeve lijekova i potvrdile farmakokinetička svojstva lijeka tijekom metabolizma lijeka. IF i IHC dvije su dijagnostičke metode koje se temelje na konceptu vezanja antigena i antitijela, iako se način detekcije u obje tehnike razlikuje. Ako koristi princip fluorescencije za otkrivanje antigena, a IHC koristi koncept kemijske konjugacije za otkrivanje antigena. To je razlika između IF i IHC.

Preuzmite PDF verziju Imunofluorescencije nasuprot imunohistokemiji

Možete preuzeti PDF verziju ovog članka i koristiti je za izvanmrežne svrhe, prema napomeni. Molimo preuzmite PDF verziju ovdje Razlika između imunofluorescencije i imunohistokemije.

Reference:

1. Aoki, Valéria i sur. "Izravna i neizravna imunofluorescencija." Anais Brasileiros de Dermatologia, SociedadeBrasileira de Dermatologia, dostupno ovdje. Pristupljeno 25. kolovoza 2017.
2. Duraiyan, Jeyapradha i sur. "Primjene imunohistokemije." Journal of Pharmacy & Bioallied Sciences, Medknow Publications & Media Pvt Ltd, kolovoz 2012, dostupan ovdje. Pristupljeno 25. kolovoza 2017.

Ljubaznošću slike:

1. „Dvostruko imunofluorescentno bojenje za BrdU, NeuN i GFAP“ Ma M, Ma Y, Yi X, Guo R, Zhu W, Fan X, Xu G, Frey WH 2nd, Liu X. - Intranazalna isporuka transformirajućih faktora rasta- beta1 kod miševa nakon moždanog udara smanjuje volumen infarkta i povećava neurogenezu u subventrikularnoj zoni; PMID 19077183 (CC BY 2.0) putem Commons Wikimedia
2. "Hipotalamus mišjeg tkiva obojenog ABC-imunohistokemijom" Autor: zabbn - Vlastito djelo (CC BY-SA 3.0) putem Commons Wikimedia