Razlika između tople i hladne tripsinizije
Share
Ključna razlika - toplo vs hladno tipizacije
Topla i hladna tripsinizam dvije su metode koje se koriste u enzimskoj raščlanjivanju stanica u kultivaciji životinjskih stanica. ključna razlika između tople i hladne tripsinizacije, kao što nazivi sugeriraju, ovisi o temperaturi na kojoj se tripsin dodaje za stanično razdvajanje. Topla trippsinizacija se odvija u uvjetima viših temperatura (36,5 - 37) 0C) budući da se hladna tripsinizacija odvija u uvjetima niskih temperatura.
Tijekom procesa kultivacije primarnih stanica životinjskih stanica primjenjene su tri glavne metode i pokazale su se uspješnima. Tri metode uključuju mehaničku raščlanjivanje stanica, enzimsku raščlanjivanje stanica i primarnu tehniku objašnjavanja. Enzimska raščlanjivanje stanica što dovodi do izolacije stanica, a vrši se enzimom tripsinom koji razgrađuje proteine. Stoga je ovaj postupak poznat i kao tripsinizacija. Trypsinizacija se može obaviti u dva različita uvjeta, naime: Topla tripsinizam i Hladna Trippsinizacija. Topla trippsinizacija je metoda tretiranja stanica tripsinom u toplim uvjetima pri temperaturi od 36,5 - 37 0C. Hladna tripsinizacija je postupak tretiranja tripsinom koji se odvija u hladnijim uvjetima, po mogućnosti u ledu uz održavanje vrlo niskih temperatura.
SADRŽAJ
1. Pregled i ključne razlike
2. Što je topla trippsinizacija
3. Što je hladna tripsinizacija
4. Sličnosti između tople i hladne trippsinizacije
5. Usporedna usporedba - Topla vs hladna tripsinzacija u tabelarnom obliku
6. Sažetak
Što je topla trippsinizacija?
Trypsinizacija se može učiniti radi razdvajanja staničnih komponenti kako bi se izolirale stanice za proizvodnju primarne stanične kulture. Trippsin je enzim za razgradnju proteina, a enzimska smjesa koja se koristi u tripsinizaciji može biti ili sirovi ekstrakt ili pročišćeni produkt. Kaže se da je sirovi ekstrakt učinkovitiji u lizi proteina i razgradnji stanica jer sadrži ostale razgradne enzime.
Topla trippsinizacija je najčešće korištena enzimska metoda za raščlanjivanje stanica koja se odvija u uvjetima viših temperatura. Prije liječenja tripsinom, željeno tkivo se usitni na manje komade. To olakšava postupak raščlanjivanja. Usitnjeno tkivo se ispere u posebnom mediju poznatom pod nazivom Dissekcijska bazalna sol.
Po završetku koraka pranja stanice se transformiraju u tikvicu koja sadrži aktivni enzim, to je tripsin. Kako ova tehnika podrazumijeva topli protokol tripsinizacije, tripsin se postavlja na temperaturu oko 37 ° C 0C oko četiri sata.
Slika 01: Trypsin
Sadržaj se miješa i miješa pomoću metode centrifugiranja radi jednostavnosti protokola i za ubrzavanje postupka razdvajanja. Kad se postigne preporučeno vrijeme, stanice se mogu izvesti iz supernatanta. Stanice dobivene iz supernatanta se zatim inkubiraju na određenoj temperaturi i vremenu.
Što je hladna tripsinizacija?
Hladna tripsinizacija je druga vrsta trippsinizacije koja se odvija u hladnim uvjetima. U ovoj tehnici stanice koje su sjeckane i isprane postavljaju se u bočice na ledu i zatim natapaju tripsinom. Razdoblje namakanja je mnogo duže - oko 6 - 24 sata.
Nakon završetka postupka namakanja, tripsin se uklanja iz staničnog lizata, a dijelovi tkiva dalje se inkubiraju na 37 ° C. 0C oko 20 - 30 minuta. Razdvajanje stanica nastaje ponovljenim pipetiranjem mješavine tkiva. To će omogućiti ćelijama da se disociraju od membrane i dođu u supernatant. Jednom kada su stanice u supernatantu, inkubiraju se i uzgajaju na željenoj temperaturi i vremenskom periodu.
Metoda hladne tripsine ima nekoliko prednosti
- Veći prinos održivih stanica s oštećenjem stanica je minimaliziran. Oštećenje stanica minimizirano je ne primjenom koraka centrifugiranja.
- Izuzetno prikladna metoda.
- Manje naporno.
Glavno ograničenje metode hladne trippinizacije je u tome što se velike količine ne mogu koristiti u jednom slučaju.
Koje su sličnosti između tople i hladne tripsinizije?
- I topli i hladni postupci trippsinizacije koriste enzim tripsin za razdvajanje stanica.
- I postupci tople i hladne tripsine koriste se u postupcima stanične kulture za razdvajanje stanica.
- U postupcima tretmana toplog i hladnog tripsina, stanice se dobivaju iz supernatanta.
Koja je razlika između tople i hladne tripsinizije?
Topla vs hladna tripsinizam | |
| Topla trippsinizacija je metoda tretiranja stanica tripsinom u toplim uvjetima pri temperaturi od 36,5 - 37 0. | Hladna tripsinizacija je postupak tretiranja tripsinom koji se odvija u hladnijim uvjetima, po mogućnosti u ledu uz održavanje vrlo niskih temperatura. |
| Protokol | |
| Sjeckani komadi tkiva održavaju se na 37 ° 0C kontinuirano tijekom cijelog postupka. | Sjeckani komadi tkiva u početku se održavaju na ledeno hladnim temperaturama, a zatim održavaju na 37 0. |
| Temperatura | |
| Topla tripsinizacija javlja se u 36.5 - 37 0 | Hladna tripsinizacija javlja se pri ledeno hladnim temperaturama. |
| Vrijeme utrošeno | |
| Manje vremena potrebno za cijeli postupak (oko 4 sata) tople tripsinizije. | Duže vrijeme potrebno (oko 6 - 24 sata) za hladnu tripsinizaciju. |
| Prinos životnih stanica | |
| S niskom toplom tripsinizmom. | Visoka u hladnoj tripsinizaciji. |
| Primjena centrifugiranja | |
| Centrifuga je potrebna za raščlanjivanje stanica u toploj tripsinizaciji. | Centrifugiranje nije potrebno u hladnoj tripsinizaciji. |
| Početna količina tkiva za tripsinizam | |
| U toploj tripsinizaciji može se koristiti veća količina tkiva. | Manja količina tkiva može se koristiti u hladnoj tripsinizaciji. |
| Oštećenja stanica | |
| Visoka zbog centrifugiranja u toploj tripsinizaciji. | Manje zbog hladne trippsinizacije. |
Sažetak - Topli vs hladno tipizacije
Trypsinizacija je metoda korištenja enzima tripsin koji razgrađuje proteine za raščlanjivanje i pripremu kultura primarnih stanica tijekom procesa kultiviranja stanica. Postoje dvije glavne tehnike tripsinizacije temeljene na temperaturama korištenim tijekom postupka. Topla je i hladna tripsinizacija. Topla trippsinizacija se provodi u 37. godini 0C budući da se hladna tripsinizacija provodi u ledeno hladnim uvjetima. Iako je hladna tripsinizacija potrebna dulje vrijeme za završetak, kaže se da ima veći prinos održivih stanica. To je zbog činjenice da je oštećenje stanica minimizirano u hladnoj tripsinizaciji jer se ne koriste snažni koraci centrifugiranja. To je razlika između tople i hladne trippsinizacije.
Referenca:
1. „tipizacije.” Trypsinization - pregled | Znanstvene teme. Dostupno ovdje
2. "Primarna kultura stanica: 3 tehnike (sa dijagramom)." Rasprava o biologiji, 16. listopada 2015. Dostupno ovdje
Ljubaznošću slike:
1. 'Tripsin aktivno web mjesto' putem Fdardel - Vlastiti rad, (CC BY-SA 3.0) putem Commons Wikimedia
