Razlika između benzonaze i DNase

Ključna razlika - Benzonaza protiv DNase

Razgradnja nukleinskih kiselina važna je za mnoge tehnike molekularne biologije. Široko se koristi u tehnologiji rekombinantne DNA kako bi se riješili neželjenih fragmenata DNK i RNA. Enzimi koji razgrađuju nukleinsku kiselinu nazivaju se Nucleases, a mogu biti različitog tipa na temelju tražene funkcije. Nukleaze koje razgrađuju DNK poznate su kao DNaze dok su one koje razgrađuju RNA poznate RNaze. Ovi enzimi se uglavnom koriste u in vitro eksperimenti gdje u vitro provode se molekularna ispitivanja za izoliranje čiste DNA, RNA ili proteina. Benzonaze su vrsta nukleusa koje razgrađuju i DNK i RNK dok DNaze razgrađuju samo DNK. To je ključna razlika između benzonaze i DNase.

SADRŽAJ

1. Pregled i ključne razlike
2. Što je benzonaza
3. Što je DNase
4. Sličnosti između benzonaze i DNaze
5. Usporedna usporedba - Benzonaza vs DNase u tabelarnom obliku
6. Sažetak

Što je benzonaza?

Benzonaza je genetski modificirana endonukleaza iz Serratia marcescens. Ovaj enzim se proizvodi u E coli domaćini u industrijskoj razmjeri. Benzonaza je sposobna cijepati dvolančanu DNA, linearnu DNA, kružnu DNK i jednolančanu RNA. Stoga je Benzonaza komercijalno važna. Enzim Benzonaza je proteinski dimer koji ima 245 identičnih aminokiselina, ~ 30 kDa podjedinica s dvije esencijalne disulfidne veze. Benzonaza cijepa nukleinske kiseline na svom kraju 5 'i rezultira fragmentima sa slobodnih 5'-kraja. Benzonaza može cijepiti nukleinske kiseline u bilo kojem slijedu, ali preferira područja bogata GC-om.

Benzonaza se čuva na -20 ⁰C. Nađeno je da je optimalni pH za aktivnost enzima 8,0 - 9,2. Primjene Benzonase uključuju pripremu uzoraka za elektroforezu proteina 2D, gdje Benzonaza uklanja vezane nukleinske kiseline i uklanjanje kontaminanata nukleinske kiseline iz rekombinantnih proteinskih pripravaka. Koristi se i za smanjenje viskoznosti proteinskih ekstrakata i sprečava nakupljanje stanica u staničnoj smjesi.

Što je DNase?

DNase je nuklearni hidrolatni enzim koji je sposoban samo cijepati dvolančane DNK. Postoje dvije glavne vrste DNaza: DNaza I i DNaza II. DNase I sudjeluje u cijepanju dvolančane DNA kako bi se dobili polinukleotidi s 5 'slobodnim krajevima. DNase II uključena je u cijepanje dvolančane DNK za proizvodnju polinukleotidnih lanaca s 3 'slobodnim krajevima ili nadvratnicima.

DNase I

DNase I djeluje na optimalnom pH između 7,0 - 8,0. Enzimska aktivnost ovisi o mnogim ionskim kofaktorima koji uključuju, Ca²⁺, mg²⁺ ili Mn²⁺. Djelatnost Mg²⁺ i Mn²⁺ odlučuje o funkciji DNaze I. U prisutnosti Mg²⁺, DNase neovisno cijepim svaki niz dsDNA. To se događa nasumično. Suprotno tome, u prisutnosti Mn^2+, enzim odvaja obje lance DNK na približno istom mjestu. Ovo cijepanje rezultirat će proizvodnjom dvije vrste fragmenata DNA; jedna vrsta s tupim krajevima i druga vrsta s jednim ili dva nukleotidna preklopa.

Slika 02: DNaza

DNaza II

Funkcije DNase II pri optimalnom pH 4,5-5,0 i dvovalentni metalni ioni potrebni su za njegovu aktivnost, slično kao DNase I. Mehanizam DNase II sastoji se od tri glavna koraka.

U DNA kralježnici inducira se više pojedinačnih lomova.
Proizvode se u kiselini topljivi nukleotidi i oligonukleotidi.
Nelinearni hiperkromni pomak događa se u posljednjoj fazi.

Glavni inhibitori enzima DNase uključuju helatore metala, prijelazne metale i kemikalije poput natrijevog dodecil sulfata i β - merkaptoetanola..

Glavne primjene DNase uključuju pripremu RNA ekstrakata bez proteina DNA i ekstrakte proteina te uklanjanje uzorka DNK tijekom eksperimenata in vitro transkripcije..

Koje su sličnosti između benzonaze i DNase?

Oba su hidrolatni enzimi.
Oboje su nukalije.
Oboje sudjeluje cijepanjem fosfodiesterskih veza nukleinskih kiselina.
Oboje zahtijevaju optimalnu pH i temperaturu skladištenja za održavanje aktivnosti enzima.
Inhibitori enzima uključuju helatne agense, prijelazne metale i kemijske deterdžente.
Aplikacije su uglavnom usredotočene na dobivanje ekstrakata visoke čistoće DNA, RNA i proteina.
Oba enzima mogu se proizvesti genetskim inženjeringom.

Koja je razlika između benzonaze i DNase?

Benzonaza vs DNase
Benzonaza je enzim koji je sposoban cijepati dvolančanu DNK, linearnu DNK, kružnu DNK i RNK.	DNaza je enzim koji je sposoban cijepati dvolančanu DNA.
Supstrat za enzim
I DNA i RNA su supstrati za benzonazu.	DNA je supstrat za DNazu.
Struktura
Optimalni raspon pH Benzonaze je 7,0 -8,0	Optimalni raspon pH DNaze I je 7,0 - 8,0, a DNaze II 4,5 - 5,0.

Pregled - Benzonaza i DNase

Nukleazni enzimi naširoko se koriste u različitim eksperimentalnim postupcima s obzirom na molekularnu biologiju i genetički inženjering. Benzonaza i DNase dvije su vrste nukleusa. Benzonaza je uključena u razgradnju i DNA i RNA dok je DNase uključena u cijepanje dvolančane DNK. Ovo je osnovna razlika između benzonaze i DNaze. Trenutno se oba ova tipa nukleaze proizvode pomoću rekombinantne DNK tehnologije koja daje enzime visoke kvalitete koji su optimizirani za maksimalnu proizvodnju.

Preuzmi PDF verziju Benzonase vs DNase

Možete preuzeti PDF verziju ovog članka i koristiti je za izvanmrežne svrhe, prema napomeni. Molimo preuzmite PDF verziju ovdje Razlika između Benzonase i DNase

Reference:

1. "Deoksiribonuklus I iz goveda pankreasa D5025." Sigma-Aldrich, dostupno ovdje. Pristupljeno 19. rujna 2017.
2. "Deoksiribonukleaza II." Deoxyribonuclease II - Priručnik za enzim Worthington, dostupan ovdje. Pristupljeno 19. rujna 2017.

Ljubaznošću slike:

1. "Preosjetljivo mjesto na DNK" Wang Y-M, Zhou P, Wang L-Y, Li Z-H, Zhang Y-N, et al. - Wang Y-M, Zhou P, Wang L-Y, Li Z-H, Zhang Y-N, et al. (2012) Povezanost raspodjele hipersenzitivne stranice na DNase I i ekspresije gena u stanicama HeLa S3. PLOČE JEDAN 7 (8): e42414. doi: 10.1371 / journal.pone.0042414 (CC BY-SA 2.5) via Commons Wikimedia

Znanost i priroda

Razlika između benzonaze ​​i DNase