Razlika između izravne i neizravne ELISA

Ključna razlika - Izravna i neizravna ELISA
 

Enzimski imuno test (ELISA), također poznat kao enzim imuno test, je serološki test koji otkriva antitijela u krvi. Koristi se kao dijagnostički alat za otkrivanje je li pacijent bio izložen određenoj vrsti virusa ili drugom infektivnom uzročniku (antigenu) i je li tijelo proizvelo antitijela protiv infekcije. ELISA također može identificirati prošle i trenutne infekcije. Stoga se liječnici često upotrebljavaju kao test za prethodnu provjeru od strane liječnika prije dubinske analize bolesti. Ovaj se test može obaviti u laboratoriju uzimanjem uzorka krvi od pacijenta. Postoje dvije vrste ELISA testa: direktna ELISA i neizravna ELISA. Ključna razlika između izravne i neizravne ELISA je ta neizravna ELISA osjetljivija je i zahtijeva dodavanje sekundarnog antitijela dok izravna ELISA manje je osjetljiva i koristi samo primarno antitijelo.

SADRŽAJ
1. Pregled i ključne razlike
2. Što je izravna ELISA
3. Što je neizravna ELISA
4. Usporedna usporedba - Izravna i neizravna ELISA
5. Sažetak

Što je izravna ELISA?

ELISA je dijagnostički test bolesti koji se izvodi radi utvrđivanja prisutnosti određenih antigena ili antitijela u krvi. Izvodi se u obliku tanjura. Koristi antitijela povezana s lako ispitivanim enzimima. Prisutnost antigena u uzorku seruma vezuje se za specifična antitijela povezana s enzimima. U završnom koraku dodaje se specifični supstrat koji reagira s enzimom. Enzim pretvara supstrat u obojeni proizvod ili proizvodi signal. Promjena boje u kemijskoj podlozi otkriva prisutnost određenog antitijela u uzorku seruma. Izravnim testom ELISA koriste se samo primarna antitijela povezana s enzimom. Vezanjem na antigen brzo mijenja boju, što ukazuje na prisutnost infektivnog agensa u krvi. Međutim, intenzitet signala je slabiji u izravnom ELISA-u jer su epitopi ograničeni na vezanje antigena. Dakle, izravna ELISA je manje osjetljiva u usporedbi s neizravnom ELISA.

Slika 01: Izravni test ELISA

Što je neizravna ELISA?

ELISA se može provesti korištenjem dvije vrste protutijela, naime; primarno antitijelo i sekundarno antitijelo. Indirektni ELISA alat koristi obje vrste protutijela da pojača signale za bolju detekciju. Neizravna ELISA tehnika izvodi se na sljedeći način.

1. Ploče se inkubiraju s antigenima i isperu da blokiraju nespecifično vezanje.
2. Tada su dodana primarna antitijela i isprana.
3. Dodaju se i isperu sekundarna antitijela povezana s enzimom.
4. Dodaje se supstrat i ostavi se da reagira s enzimima.
5. Signali se otkrivaju i utvrđuje se prisutnost ili odsutnost specifičnog antigena u uzorku.

U indirektnom ELISA testu, nekoliko sekundarnih antitijela može se vezati za jedno primarno antitijelo. Sekundarna antitijela povezana su s lako ispitivanim enzimima. Stoga jedno vezanje može dati jak signal zbog više interakcija. Dakle, neizravna ELISA osjetljivija je od izravne ELISA. Međutim, neizravni ELISA može dati nespecifične signale zbog unakrsnih reakcija sekundarnih antitijela.

Slika 02: Neizravni test ELISA

Koja je razlika između izravne i neizravne ELISA?

Izravni vs neizravni ELISA
Izravna ELISA je manje osjetljiva u usporedbi s neizravnom ELISA.	Neizravna ELISA osjetljivija je.
Vrijeme potrebno
Izravni test ELISA brz je proces.	Neizravna ELISA zahtijeva mnogo vremena.
Primjena antitijela
U izravnom ELISA koristi se samo jedna vrsta antitijela (primarna antitijela).	Primarna i sekundarna antitijela koriste se za indirektnu ELISA.
Veza s enzimima
Primarna antitijela su povezana s enzimima.	Sekundarna antitijela povezana su s enzimima.
Unakrsna reaktivnost drugih antitijela
Izravna ELISA eliminira unakrsnu reaktivnost drugih antitijela.	Neizravna ELISA utječe na unakrsnu reaktivnost drugih antitijela.
signali
Signali su slabi u usporedbi s indirektnim ELISA.	Signali se pojačavaju u indirektnom ELISA-u. Otuda je to lako otkriti.

Sažetak - Direktna vs neizravna ELISA

ELISA je biokemijska tehnika koja se uglavnom koristi u imunologiji za otkrivanje prisutnosti antitijela ili antigena u uzorku krvi pacijenta. Može se provesti kroz dva postupka poznata kao izravna ili neizravna ELISA. Izravni test ELISA koristi samo primarna antitijela za otkrivanje antigena, dok neizravni ELISA koristi i primarna i sekundarna antitijela. U izravnom ELISA-u označena su primarna antitijela dok su u indirektnom ELISA sekundarna antitijela označena. To je razlika između izravne i neizravne ELISA.

Reference
1. "Analiza imunogorbenskog procesa (ELISA)." Bilten Svjetske zdravstvene organizacije. Američka nacionalna medicinska knjižnica, 1976. Web. 29. ožujka 2017
2. Loon, A. M van, J. T Van Der Logt, F. W. Heessen i J. Van Der Veen. "Analiza imunogorbensa povezana s enzimom koja koristi označeni antigen za otkrivanje imunoglobulina M i A protutijela u toksoplazmozi: usporedba s indirektnom imunofluorescencijom i dvostrukim sendvič testom imunosorbentom." Časopis za kliničku mikrobiologiju. Američka nacionalna medicinska knjižnica, lipanj 1983. Web. 29. ožujka 2017

Ljubaznošću slike:
1. "ELISA-dijagram" Cavitri - Vlastiti rad (CC BY 3.0) putem Commons Wikimedia 
2. "Indirektna ELISA" Cawang - Vlastito djelo (CC0) putem Commons Wikimedia