Razlika između tankog sloja papira i kromatografije na stupcu

Ključna razlika - papir vs tanki sloj vs Stupac kromatografija
 

Papirna kromatografija, tankoslojna kromatografija i kromatografija na stupcu tri su vrste kromatografskih tehnika. ključna razlika između papirne kromatografije, tankoslojne kromatografije i kromatografije na stupcu temelje se na vrsti stacionarne faze koja se koristi u tehnici kromatografije. Hromatografija papira koristi celulozni papir kao stacionarnu fazu, tankoslojna kromatografija kao stacionarnu fazu koristi glinicu ili silikagel, dok kolonasta kromatografija koristi stupac prepun odgovarajućeg matriks materijala kao stacionarnu fazu.

U procesu odvajanja i identifikacije biomolekula poput proteina i ugljikohidrata, kromatografija je važna biofizička tehnika koja se koristi. Kromatografija razdvaja spojeve na temelju njihove topljivosti, veličine i naboja. Na temelju mehanizma razdvajanja, kromatografija koristi mehanizme poput ionske razmjene, apsorpcije, odvajanja particija i veličine te postoje tri kromatografske tehnike; naime papir, tanki sloj i kromatografija na stupcu. Kromatografija papira temelji se na adsorpciji krute tekućine i topljivosti spoja, a kao stacionarnu fazu koristi se celulozni papir. Tankoslojna kromatografija temelji se na adsorpciji molekula čvrsto-tekuće. Ima stacionarnu fazu koja se obično pravi od glinice ili silikagela i mobilnu fazu koja je otapalo. Stupnom kromatografijom koristi se stup nabijen matricom koji se koristi za odvajanje molekula uglavnom na temelju njihove veličine, afiniteta ili naboja.

SADRŽAJ

1. Pregled kromatografije i ključne razlike
2. Što je papirna kromatografija
3. Što je tankoslojna kromatografija
4. Što je kromatografija na stupcu
5. Sličnosti između papirne, tanke slojeve i kromatografije na stupcu
6. Usporedna usporedba - papir u odnosu na tanki sloj i kromatografiju na stupcu u tabelarnom obliku
7. Sažetak

Što je papirna kromatografija?

Papirna kromatografija najjednostavnija je vrsta kromatografije koja se koristi, a ne koristi se za opsežna istraživanja. Uglavnom se koristi u studentskim laboratorijima za identifikaciju biomolekula poput aminokiselina i ugljikohidrata prisutnih u smjesama. Hromatografija na papiru koristi stacionarnu fazu koja se izrađuje pomoću papirnog celuloznog papira ili filtera Whatman i mobilne faze koja se obično priprema organskim otapalima poput n-butanola itd. Stacionarna faza je zasićena vodom, a stacionarna faza postaje tečna. Stoga, kad se spojevi uoče i ostave da teku u prisutnosti pokretne faze, ovisno o topljivosti spojeva, odvajaju se. Prema tome, nakon razvoja kromatograma, može se izvršiti bojenje kako bi se odredila dužina trajanja svakog spoja. Stoga se može izračunati retencijski faktor.

Slika 01: Papirna kromatografija

Hromatografija na papiru može se dalje klasificirati kao uzlazna kromatografija na papiru i silazna papirna kromatografija, ovisno o smjeru tekućeg otapala.

Što je tankoslojna kromatografija?

Tankoslojna kromatografija ili TLC je uobičajena tehnika za identificiranje različitih aminokiselina prisutnih u smjesi ili za identifikaciju proteina. Tehnika razdvajanja temelji se na adsorpciji kruta-tekućina. Tijekom tankoslojne kromatografije, kao stacionarna faza koristi se ploča izrađena od glinice ili silikagela. Smjesa otapala varira ovisno o zahtjevu i mogu koristiti različite kombinacije organskih spojeva, poput n-butanola, octene kiseline i vode, da pripreme otapalo. Spojevi koji se odvajaju nalaze se na pločici i uranjaju u smjesu otapala. Jednom kada otapalo djeluje na osnovu kapilarnog djelovanja ploče, spojevi nađeni na ploči također se kreću ovisno o njihovoj topljivosti u otapalu.

Slika 02: Tankoslojna kromatografija

Otkrivanje mrlja nakon kromatograma vrši se različitim postupcima bojenja. Neki koriste obojenje ninhidrinom što je prilično toksična metoda bojenja. Suvremeni tankoslojni kromatogrami koriste fluorescentne tehnike za pregled kromatograma nakon ispitivanja. Ovisno o udaljenosti koju je prešao, može se izračunati vrijeme zadržavanja svakog spoja. Ovo se može koristiti za identificiranje vrste razdvojenog spoja na temelju korištene smjese. TLC se uglavnom koristi za identificiranje aminokiselina u proteinskoj smjesi i za odvajanje različitih vrsta monosaharida prisutnih u smjesi.

Što je kromatografija na stupcu?

Stupna kromatografija široki je pojam koji se koristi za opisivanje mnogih vrsta kromatografskih tehnika koje koriste metodu odvajanja koja se temelji na stupcu. U kromatografiji na stupcu koristi se fizički stupac s materijalom za pakiranje da bi se odvojili spojevi. Odvajanje se može temeljiti na različitim fizikalnim svojstvima koja pokazuju spojevi. Ta svojstva mogu biti naboj, veličina, 3D konformacija i sposobnost vezanja itd. Dakle, stupac nabijen materijalom matrice djeluje kao stacionarna faza, a pufer za pranje primijenjen na stupac djeluje kao pokretna faza.

Ako se molekule odvoje na temelju veličine, materijal za pakiranje se pakira na način da ostavlja pore za spojeve koji mogu prolaziti kroz njih. Dakle, veće molekule koje ne mogu prolaziti kroz pore prvo se eluiraju, dok manjim molekulama treba mnogo duže vremena da se eluiraju..

Slika 03: Stupna kromatografija

Ako se molekule odvoje na temelju njihovog naboja, stacionarna faza će sadržavati ili anionski ili kationski izmjenjivač na koje će se spojevi privući na temelju njihovog naboja. Dakle, tijekom koraka pranja, neovezani spojevi će se eluirati. Nakon dodavanja elucijskog pufera, vezani nabijeni spojevi će se eluirati. Detekcija ovih eluenta uglavnom se temelji na spektrofotometrijskim tehnikama.

Koje su sličnosti između papirnatog tankog sloja i kromatografije na stupcu?

• Sve papirne tanke slojeve i kromatografija na stupcu koriste se tri tehnike za odvajanje biomolekula poput aminokiselina, proteina i ugljikohidrata.
• Tehnike papirnog tankog sloja i kromatografije na stupcu imaju pokretnu i stacionarnu fazu.
• Tehnike papirne tankoslojne i stupne kromatografije koriste biofizičke mehanizme za razdvajanje.

Koja je razlika između tankog sloja papira i kromatografije na stupcu?

Papir protiv tankog sloja naspram kromatografije na stupcu
Kromatografija na papiru	Papirna kromatografija je kromatografska tehnika koja upotrebljava za odvajanje spojeva temeljenih na adsorpciji tekućina-tekućina i topljivosti spoja. Kao stacionarnu fazu koristi se celulozni papir.
Kromatografija tankog sloja	Tankoslojna kromatografija je druga kromatografska tehnika koja se temelji na adsorpciji molekula čvrsto-tekuće. Ima stacionarnu fazu izrađenu od glinice ili silikagela i otapalo kao mobilnu fazu, koja je otapalo.
Kromatografija na stupcu	Stupnom kromatografijom koristi se stup nabijen matricom koji se koristi za odvajanje molekula uglavnom na temelju njihove veličine, afiniteta ili naboja.
Stacionarna faza
Kromatografija na papiru	Papir izrađen od nitroceluloze Whatmana koristi se kao stacionarna faza u papirnoj kromatografiji.
Kromatografija tankog sloja	Kao stacionarna faza kromatografije u tankom sloju koristi se glinica ili silikagel.
Kromatografija na stupcu	Kao stacionarna faza u kromatografiji na stupcu koristi se stupac nabijen prikladnim materijalom za pakiranje.
Pokretna faza
Kromatografija na papiru	Tekuće otapalo je pokretna faza kromatografije na papiru.
Kromatografija tankog sloja	Tekuće otapalo je pokretna faza tankoslojne kromatografije.
Kromatografija na stupcu	Pufer za ispiranje je pokretna faza kromatografije na stupcu.
Mehanizmi koji se koriste za razdvajanje
Kromatografija na papiru	Kromatografija papira temelji se na apsorpciji krute tekućine.
Kromatografija tankog sloja	Tankoslojna kromatografija temelji se na apsorpciji kruta-tekućina.
Kromatografija na stupcu	Stupna kromatografija temelji se na isključenju veličine, naboja i oblika.
Elucijski pufer
Kromatografija na papiru	Ne zahtijeva se papirnom kromatografijom.
Kromatografija tankog sloja	Nije potrebno za tankoslojnu kromatografiju.
Kromatografija na stupcu	Zahtijeva se kolonskom kromatografijom.
Otkrivanje
Kromatografija na papiru	Bojenje i određivanjem zadržavajućeg faktora.
Kromatografija tankog sloja	Bojenje i određivanjem zadržavajućeg faktora.
Kromatografija na stupcu	Spektrofotometrijsko određivanje.

Sažetak - Papir tanki sloj vs Stupac kromatografija

Papirna kromatografija, TLC i kromatografija na stupcu su tehnike razdvajanja koje se koriste za odvajanje biomolekula poput proteina, aminokiselina i ugljikohidrata (uglavnom monosaharida). Papirna kromatografija koristi celulozni papir kao stacionarnu fazu, a mehanizam razdvajanja temelji se na adsorpciji krute tekućine. TLC također koristi mehanizme adsorpcije krute tekućine. Molekule su razdvojene na stacionarnoj fazi, ovisno o njihovoj topljivosti u pokretnoj fazi. Stupnom kromatografijom za razdvajanje se koriste fizička svojstva kao što su veličina, oblik, naboj i molekularna težina spoja. Stupac nabijen materijalom matriksa djeluje kao stacionarna faza, dok pufer za pranje djeluje kao faza otapala. To je razlika između papirnog tankog sloja i kromatografije na stupcu.

Referenca:

1.Klark, Jim. "Tanka slojevita kromatografija." Tankoslojna kromatografija, 2007. Dostupno ovdje 
2.Coskun, Ozlem. "Tehnike razdvajanja: kromatografija." Northern Clinics of Istanbul, Kare Publishing, 2016. Dostupno ovdje 

Ljubaznošću slike:

1. 'Spremnik za kromatografiju' (CC BY-SA 3.0) putem Commons Wikimedia  
2.'Tlc slijed 'putem Quantockgoblin, (Javna domena) putem Commons Wikimedia
3. 'Stupna kromatografija' (Javna domena) putem Commons Wikimedia