Razlika između stranice SDS i zapadnog blota

Ključna razlika - SDS stranica protiv zapadnog blota
 

Western blotting je tehnika koja detektira određeni protein iz uzorka proteina. Ova se tehnika izvodi kroz nekoliko ključnih koraka: elektroforeza gela, upijanje i hibridizacija. Elektroforeza natrijevog dodecil sulfata poliakrilamid gel (SDS Page) je vrsta gel elektroforeze koja se koristi za odvajanje proteina prema njihovoj veličini (molekularna težina). Western blot je poseban lim za blot membranu koji se koristi za prijenos istog uzorka proteina u SDS stranici. Ključna razlika između Stranke SDS-a i zapadne mrlje je u tome SDS Page omogućava odvajanje proteina u smjesi dok Western blot omogućava otkrivanje i kvantificiranje specifičnog proteina iz smjese. Oboje su korisni u studijama analize proteina.

SADRŽAJ
1. Pregled i ključne razlike
2. Što je stranica SDS
3. Što je Western blot
4. Usporedna usporedba - Stranica SDS-a prema zapadnom blotu
5. Sažetak

Što je stranica SDS?

SDS Page je tehnika gel elektroforeze koja se koristi za odvajanje proteina. Uobičajeno se koristi u biokemiji, genetici, forenzici i molekularnoj biologiji. Nakon što se proteini ekstrahiraju iz uzorka, oni se stavljaju na gel sastavljen od SDS-a i poliakrilamida. SDS je anionski deterdžent koji se koristi za linearizanje proteina (denatura proteina) i davanje negativnog naboja linearizovanim proteinima proporcionalnim njihovoj molekulskoj masi. Poliakrilamid postaje čvrsta potpora gelu. Denaturirani proteini negativno nabijeni migriraju prema gelu pozitivnom kraju aparata. Prema veličini proteina, brzine migriranja razlikuju se među proteinima i dolazi do odvajanja. Stoga je SDS stranica korisna za odvajanje pojedinih proteina na osnovu njihovih veličina.

Priprema poliakrilamidnog gela za frakcioniranje proteina presudni je korak u SDS. Ispravna koncentracija poliakrilamida i vrsta upotrijebljenog sredstva za umrežavanje snažno utječu na fizička svojstva gela, zbog čega je stvarno razdvajanje različitih proteina. Potrebno je pravilno upravljati veličinama pora gela za učinkovito odvajanje. Međutim, SDS Page smatra se tehnikom razdvajanja proteina visoke rezolucije.

SDS Page tehnika ima veliko ograničenje u analizi proteina. Budući da SDS denaturira proteine ​​prije odvajanja, ne dozvoljava otkrivanje enzimske aktivnosti, interakcije vezanja proteina, proteinskih kofaktora itd..

Slika 01: Stranica SDS

Što je Western Blot?

Western blotting tehnika omogućava otkrivanje određenog proteina iz proteinske mješavine i mjerenje količine i molekularne težine proteina. Western blot je membrana koja se upotrebljava tijekom postupka mrljanja kako bi se dobila zrcalna slika uzoraka proteina u SDS-poliakrilamidnom gelu. Membrana koja se koristi za zapadnjavanje blotinom sastoji se većinom od nitroceluloze ili polivinililiden difluorida (PVDF). Membrana s prenesenim proteinom može se koristiti za identificiranje željenog proteina. Za detekciju željenog proteina hibridizacijom su potrebna kvalitetna antitijela. Antitijelo se veže na njegov specifični antigen i otkriva prisutnost željenog antigena koji je protein.

Prijenos proteina iz SDS-ovog poliakrilamidnog gela u zapadnu mrlju provodi se elektroblokiranjem. To je učinkovita i brza metoda koja uzrokuje elektroforezu proteina iz gela i prelazak na nitroceluloznu membranu (Western blot).

Slika 02: Western Blot

Koja je razlika između Stranke SDS-a i Western Blota?

Stranica SDS-a protiv Western Blota
SDS Page je tehnika elektroforeze u obliku gela.	Western blot je tehnika koja se provodi na membrani da se otkrije određeni protein iz smjese.
Koristiti
SDS stranica omogućava odvajanje proteina prema njihovoj veličini.	Western blot omogućuje prijenos proteina na SDS stranici gel bez promjene uzorka i omogućava hibridizaciju sa specifičnim antitijelima.
Nedostaci
Denaturacija proteina, skupi troškovi i prisutnost neurotoksinskih kemikalija nedostatak su ove tehnike.	Ova je tehnika dugotrajna i zahtijeva dobro iskusne osobne i specifične kontrolirane uvjete.

Rezime - Stranica SDS-a u odnosu na Western Blot

SDS stranica i Western blot dvije su metode uključene u analizu proteina. SDS Page omogućava lako odvajanje proteina na gelu u skladu s njihovom molekularnom težinom. Western blot pomaže potvrditi prisutnost i količinu određenog proteina hibridizacijom specifičnim antitijelima. To je razlika između SDS-ove stranice i zapadnog blota.

Reference:
1. Blancher, C. i A. Jones. "SDS-STRANICA i tehnike zapadnog pjeskarenja." Metode u molekularnoj medicini. Američka nacionalna medicinska knjižnica, n.d. Mreža. 27. ožujka 2017
2. Nowakowski, Andrew B., William J. Wobig i David H. Petering. "Native SDS-PAGE: Elektroforetsko razdvajanje proteina visoke razlučivosti uz zadržavanje nativnih svojstava, uključujući metalne ione." Metallomika: integrirana biometalna znanost. Američka nacionalna medicinska knjižnica, svibanj 2014. Web. 27. ožujka 2017.

Ljubaznošću slike:
1. "SDS-PAGE Electrophoresis" autor Bensaccount-a na engleskoj Wikipediji (CC BY 3.0) putem Commons Wikimedia
2. "Western blot 114A" napisao Amanthabagdon - Vlastiti rad (Public Domain) putem Commons Wikimedia