Razlika između stranice SDS-a i izvorne stranice

Ključna razlika - SDS Stranica protiv Native Stranica
 

SDS i izvorna stranica dvije su tehnike elektroforeze poliakrilamidnog gela koje se koriste u molekularnoj biologiji. ključna razlika između SDS stranice i Native Page je vrsta poliakrilamidnog gela. Stoga se u SDS Page upotrebljava denaturirajući gel, molekule su odvojene na temelju njihove molekularne težine. Suprotno tome, u Native Page-u se koriste nonnaturativni gelovi. Stoga se molekule odvajaju na temelju njihove veličine, naboja i oblika.

Poliakrilamid gel elektroforeza (Stranica) koristi gel proizveden polimerizacijom monomera akrilamida metilen bizakrilamidom. Poliakrilamid je čvršći i toplinski stabilniji od agaroze. Poliakrilamidni geli imaju manju veličinu pora koji omogućava učinkovito odvajanje proteina. Postoje dvije glavne vrste postavljanja stranice, naime Stranica sa SDS-om i Native Page. Stranica SDS ili Natrijev-dodecil sulfat poliakrilamid gel elektroforeza odvaja proteine ​​na temelju njihove molekularne težine. Denaturacijski gelovi koriste se u SDS stranici. Native Page koristi gele koji ne denaturiraju i odvaja proteine ​​na temelju njihove veličine, naboja i oblika (3D konformacija).

SADRŽAJ

1. Pregled i ključne razlike
2. Što je stranica SDS
3. Što je izvorna stranica
4. Sličnosti između stranice SDS-a i izvorne stranice
5. Usporedna usporedba - Stranica SDS prema izvornoj stranici u tabličnom obliku
6. Sažetak

Što je stranica SDS?

SDS Page je najčešća elektroforetska tehnika koja se koristi za odvajanje proteina na osnovu njihove molekularne težine. Gel je proizveden dodavanjem SDS (Natrijev dodecil sulfat), koji je deterdžent. SDS protezira proteine ​​u monomere. SDS je anionski deterdžent. Stoga dodaje neto negativan naboj proteinima u širokom pH području. Kad se neto negativni naboj daje molekulama proteina, zbog promjene naboja, složene strukture se razgrađuju. Zbog negativnog naboja, proteini privlače prema pozitivnom kraju. Tako molekule s nižom molekularnom težinom brže putuju na gel matriksu i mogu se promatrati blizu anode, dok se proteini veće molekularne težine promatraju bliže jažici.

Slika 01: Stranica SDS

Vezanje SDS-a na polipeptidni lanac proporcionalno je relativnoj molekulskoj masi. Zbog toga se molekulska masa može odrediti i pomoću SDS stranice. Bojanje SDS Page gelova se vrši bromofenol plavim bojenjem. Primjene stranica SDS u većoj mjeri se kreću tamo gdje se može koristiti za procjenu relativne molekulske mase i za određivanje relativnog broja proteina u proteinskoj smjesi. SDS Page se također može koristiti za određivanje raspodjele proteina u mješavini proteina. SDS Stranica se također primjenjuje za pročišćavanje i procjenu proteina. Koristi se kao preliminarni postupak zapadnog blotiranja i hibridizacije, koji se pak koristi za mapiranje i identifikaciju proteina.

Što je izvorna stranica?

Elektroforeza izvornog poliakrilamidnog gela (Native Page) koristi gel koji ne denaturira. Zbog toga se SDS ili bilo koje drugo sredstvo za denaturaciju ne dodaje u gel matricu. U Native Page, razdvajanje proteina temelji se na naboju i veličini proteina. Dakle, pokretljivost proteina ovisi o naboju i veličini proteina.

Naboj proteina ovisi o bočnim lancima aminokiselina. Ako su bočni lanci negativno nabijeni, protein će dobiti ukupni negativni naboj i obrnuto. Proteini zadržavaju 3D konformaciju zbog savijanja koja se događa. Savijanje je rezultat nekoliko vrsta veza u proteinima kao što su disulfidne veze, hidrofobne interakcije i vodikove veze. Stoga, ako se izvorni Page nosi na neutralnom pH, proteini će se odvojiti u skladu s molekularnim oblikom proteina. Stoga se Native Page može koristiti kao osjetljiva tehnika za otkrivanje promjene naboja ili konformacije proteina.

Glavna prednost izvorne stranice jest u tome što se protein korišten za analizu stranice može vratiti u prvobitno stanje nakon analize stranice, jer se protein ne poremeti tokom procesa. Native Page je relativno visoka propusnost i povećava se stabilnost proteina.

Slika 02: Izvorna stranica

Po završetku gela, Native Page gel može se pregledati bojenjem bromofenolom plavim ili bilo kojim drugim prikladnim reagensom za bojenje. Primjena Native Page uključuje razdvajanje kiselih proteina uključujući glikoproteine ​​poput ljudskog rekombinantnog eritropoetina ili identifikaciju proteina prisutnih u goveđem serumskom albuminu (BSA).

Koje su sličnosti između Stranice SDS-a i Native Page-a?

• Oba SDS Page i Native Page sustava koriste poliakrilamidni gel kao matricu gela.
• Oba se koriste za odvajanje i identifikaciju proteina.
• Oboje koriste elektroforetsku pokretljivost za odvajanje spojeva.
• Oba mogu biti izvedena okomito ili horizontalno (uglavnom se rade kao vertikalne postavke stranice jer je duljina izvođenja veća).
• Za rad obje tehnike potreban je aparat za elektroforezu, uključujući spremnik gela, češljeve, napajanje.
• Vizualiziranje gela može se obaviti postupkom bojenja u obje tehnike.

Koja je razlika između Stranice SDS-a i Native Page -a?

Stranica SDS-a vs Native Page
SDS Page ili Sodium-dodecil sulfat Page razdvaja proteine ​​na osnovi njihove molekularne težine i koristi denaturirajući gel.	Native Page koristi gele koji ne denaturiraju i odvaja proteine ​​na temelju njihove veličine, naboja i oblika (3D konformacija).
Vrsta gela
Na SDS-stranici se koristi gel za denaturaciju.	Na matičnoj se stranici upotrebljava denaturirajući gel.
Prisutnost SDS-a
SDS je prisutan kao deterdžent za emitiranje negativnog naboja na uzorku na SDS stranici.	SDS ne postoji na matičnoj stranici.
Osnove odvajanja
Odvajanje proteina ovisi o molekularnoj težini proteina u SDS stranici.	Razdvajanje ovisi o veličini i obliku proteinske molekule na izvornoj stranici.
Stabilnost proteina
Stabilnost proteina je na SDS stranici niska.	Stabilnost proteina je visoka na početnoj stranici.
Oporavak izvornog proteina
Nije moguće jer je denaturirano na SDS stranici.	Moguće na početnoj stranici.

Sažetak - Stranica SDS vs Native Stranica

SDS Page i Native Page dvije su tehnike elektroforeze poliakrilamidnog gela koje se koriste za odvajanje proteina. Stranica SDS obrađuje se deterdžentom koji se naziva SDS. SDS daje ukupni negativni naboj proteinu, što rezultira denaturacijom proteina. Stoga se proteini odvajaju na temelju njihove molekularne težine. Suprotno tome, tehnika Native Page ne koristi nijedno sredstvo za denaturaciju. Tako se proteini ili odvajaju na osnovu njihove veličine ili oblika. To je razlika između SDS stranice i matične stranice.

Referenca:

1. "Načelo i metoda elektroforeze gela poliakrilamidnog gela (SDS-PAGE)." Princip i metoda elektroforeze poliakrilamidnog gela (SDS-PAGE) | MBL Life Sience -ASIA-. Dostupno ovdje
2. "Nativni gelovi." Alliance Protein Laboratories | Biofizičke usluge karakterizacije. Dostupno ovdje  

Ljubaznošću slike:

1.'SDS-PAGE Electrophoresis'By Bensaccount na engleskoj Wikipediji, (CC BY 3.0) putem Commons Wikimedia  
2.'Ustavite uzorak u elektroforezu s poliakrilamidnim gelom 'Blaz Nemec iz Ljubljane, Slovenija (CC BY-SA 2.0) putem Commons Wikimedia