Restriktivni enzim, koji se češće naziva restrikcijskom endonukleazom, ima sposobnost cijepanja molekula DNA na male fragmente. Ovaj postupak cijepanja događa se blizu ili na posebnom mjestu prepoznavanja molekule DNA, koje se naziva mjesto restrikcije. Mjesto prepoznavanja obično se sastoji od 4-8 parova baza. Ovisno o mjestu cijepanja, restrikcijski enzimi mogu biti četiri vrste; Tip I, tip II, tip III i tip IV. Uz mjesto cijepanja, čimbenici kao što su sastav, zahtjev ko-faktora i stanje ciljane sekvence uzimaju se u obzir prilikom diferencijacije restriktivnih enzima u četiri skupine. Tijekom cijepanja molekule DNA, mjesto cijepanja može biti bilo na samom mjestu restrikcije ili na udaljenosti od mjesta restrikcije. Tijekom procesa cijepanja DNK, restrikcijski enzimi stvaraju dva ureza kroz svaku kralježnicu šećera-fosfata u dvostrukoj spirali DNA. Restriktivni enzimi nalaze se uglavnom u Achaea i bakterijama. Oni koriste ove enzime kao obrambeni mehanizam protiv invazivnih virusa. Restriktivni enzimi cijepaju tuđu (patogenu) DNK, ali ne i vlastitu DNK. Vlastita DNA zaštićena je enzimom poznatim kao metiltransferaza koji vrši modifikacije u domaćinskoj DNK i sprječava cijepanje. Zaštitni enzim tipa I posjedujesebia mjesto cijepanja koje je udaljeno od mjesta prepoznavanja. Zaštitni enzimi tipa II cijepaju se unutar samog mjesta prepoznavanja ili na bliže udaljenosti od njega. Ovo je ključna razlika između restrikcijskog enzima tipa I i tipa II.
1. Pregled i ključne razlike
2. Što je enzim za ograničenje tipa I
3. Što je enzim za ograničavanje tipa II
4. Sličnosti između tipa I i tipa II restriktivnog enzima
5. Usporedna usporedba - ograničenje enzim tipa I protiv tipa II u tabelarnom obliku
6. Sažetak
Zaštitni enzimi tipa I su pentamerni proteini sastavljeni od tri multijedinice: restrikcijske podjedinice, metilacijske podjedinice i podjedinice za prepoznavanje sekvenci DNA. Ove su podjedinice neidentične. Oni su u početku identificirani u dva različita oblika Escherichia coli. Mjesto cijepanja ovih restrikcijskih enzima prisutno je u različitim slučajnim točkama, obično 1000 parova baza udaljeno od mjesta prepoznavanja. Ti restrikcijski enzimi zahtijevaju ATP, Mg2+ i S-adenozil-L-metionin za njegovu aktivaciju. Restrikcijski enzimi tipa I posjeduju i metilazu i restrikcijske aktivnosti. Bakterije koriste restrikcijske enzime kao stanični obrambeni mehanizam od invazije virusa. Restriktivni enzimi cijepaju virusnu DNK i uništavaju ih. Ali da bi se spriječilo cijepanje vlastite DNA domaćina, restrikcijski enzim tipa I pruža zaštitu od metilacije. Time se mijenja DNK domaćina i sprječava cijepanje. Iako su ovi restrikcijski enzimi biokemijski važni, ne koriste se široko jer ne osiguravaju diskretne restrikcijske fragmente ili obrasce vezanja gela..
Zaštitni enzimi tipa II sadrže dvije identične podjedinice u svojoj strukturi. Homodimeri nastaju restrikcijskim enzimima tipa II s prepoznatljivim mjestima. Mjesta za prepoznavanje su obično palindromna i nepodijeljena su. Duljina je 4-8 baznih parova. Za razliku od tipa I, mjesto cijepanja restriktivnog enzima tipa II prisutno je na mjestu prepoznavanja ili je prisno na mjestu prepoznavanja.
Slika 02: Enzimi za ograničavanje tipa II
Ti restrikcijski enzimi su biokemijski značajni i široko su dostupni u prodaji. Za njegovu aktivaciju potreban je samo Mg2+. Nema metilacijsku aktivnost i pruža samo funkciju restriktivne aktivnosti. Ovi restrikcijski enzimi vežu se za molekule DNK kao homodimeri i imaju sposobnost prepoznavanja simetričnih DNK sekvenci kao i asimetričnih sekvenci.
Enzim za ograničenje tipa I protiv tipa II | |
Restrikcijski enzim tipa I je restrikcijski enzim DNA koji cijepa DNK na nasumična mjesta koja su daleko od mjesta prepoznavanja. | Restrikcijski enzim tipa II je restrikcijski enzim DNK koji cijepa DNK na definiranim položajima blizu ili unutar mjesta prepoznavanja. |
Sastav | |
Restriktivni enzim tipa I složen je enzim koji se sastoji od tri (03) neidentične podjedinice. | Restriktivni enzim tipa II jednostavan je enzim koji je sastavljen od dvije identične podjedinice. |
Molekularna težina | |
Zaštitni enzim tipa I teži 400 000 daltona. | Zaštitni enzim tipa II ima raspon težine od 20 000 do 100 000 daltona. |
Slijed rascjepa | |
Sekvencija cijepanja nije specifična za restrikcijski enzim tipa I. | Zaštitni enzim tipa II ima specifičan redoslijed cijepanja. |
Mjesto cijepanja | |
Mjesto cijepanja je 1000 nukleotida udaljeno od mjesta prepoznavanja u restrikcijskim enzimima tipa I. | Mjesto cijepanja prisutno je na mjestu prepoznavanja ili na maloj udaljenosti od mjesta prepoznavanja u restrikcijskom enzimu tipa II. |
Kofaktori za aktivaciju | |
Za restriktivni enzim tipa I potreban je ATP, Mg2+ i S-adenozil-L-metionin za njegovu aktivaciju. | Za aktiviranje restrikcijskog enzima tipa II potreban je samo Mg2 +. |
Aktivnost metilacije | |
Enzim tipa I pruža zaštitu DNK metilacijom. | Nema aktivnosti metilacije u restrikcijskim enzimima tipa II. |
Aktivnost enzima | |
Restriktivni enzim tipa I pruža i aktivnosti endonukleaze (restrikcije) i metilacije. | Restriktivni enzim tipa II pruža samo restriktivnu aktivnost. |
Primjeri | |
EcoK, EcoB | Hind II, EcoRI |
Restriktivni enzimi nazivaju se biološkim škarama koje cijepaju molekule DNK u manje tvari. Restriktivni enzimi podijeljeni su u 04 različite kategorije ovisno o mjestu cijepanja s obzirom na mjesto prepoznavanja, prisutnih ko-faktora, sastav i stanje ciljne sekvence. Za svoju aktivaciju, restrikcijskim enzimima tipa I potreban je ATP, Mg2+, i S-adenozil-L-metionin. Mjesto cijepanja restrikcijskog enzima tipa I obično je prisutan 1000 baznih parova udaljeno od mjesta prepoznavanja i pruža zaštitu od metilaze DNA. Za enzim restrikcije tipa II potreban je samo Mg2+ za njegovo aktiviranje. Mjesto cijepanja prisutno je na mjestu prepoznavanja ili blizu njega. Nema aktivnost metilacije i široko je dostupan u prodaji. Ovo je razlika između restrikcijskog enzima tipa I i restrikcijskog enzima tipa II.
Možete preuzeti PDF verziju ovog članka i koristiti je za izvanmrežne svrhe, prema napomeni. Molimo preuzmite PDF verziju ovdje. Razlika između tipa I i II. Ograničenja.
1. Biolabs, Nova Engleska. "Vrste ograničenja Endonucleases." Vrste restrikcije Endonucleases | NEB, dostupno ovdje. Pristupljeno 25. kolovoza 2017.
2. Pingoud, A i sur. "Ograničenje tipa II, endokruse - povijesna perspektiva i još mnogo toga." Istraživanje nukleinskih kiselina., Američka nacionalna medicinska knjižnica, srpanj 2014., dostupno ovdje. Pristupljeno 25. kolovoza 2017.
2. Loenen, WA i sur. "Zaštitni enzimi tipa I i njihova rodbina." Istraživanje nukleinskih kiselina., Američka nacionalna medicinska knjižnica, siječanj 2014., dostupno ovdje. Pristupljeno 25. kolovoza 2017.
1. "Restriktivni enzim Eco RI" Tinastella - Vlastiti rad (Public Domain) putem Commons Wikimedia