Vektori se koriste u molekularnom kloniranju. Vektor se može definirati kao molekula DNA koja se ponaša kao nosač za nošenje stranog genetskog materijala u drugu ćeliju. Vektor koji sadrži stranu DNK poznat je kao rekombinantna DNK i trebao bi ga moći reproducirati i izraziti u organizmu domaćina. Umjetni kromosom kvasca (YAC) i umjetni kromosom bakterija (BAC) su dvije vrste vektora uključenih u kloniranje. Ključna razlika između YAC-a i BAC-a je u tome YAC je umjetno izgrađen vektorski sustav koji koristi određeno područje kromosoma kvasca za umetanje velikih segmenata genetskog materijala u stanice kvasca. dok BAC je umjetno izgrađen vektorski sustav koji koristi određeno područje regije E coli kromosom za umetanje velikih segmenata DNK u E coli Stanice.
SADRŽAJ
1. Pregled i ključne razlike
2. Što su YAC Vektori
3. Što su BAC vektori
4. Usporedna usporedba - YAC i BAC vektori
5. Sažetak
YAC (umjetni kromosom kvasca) umjetno je izgrađen kromosom koji ima mogućnost nošenja velikog segmenta strane DNK i umnožavanja unutar stanica kvasca. Ima centromere, telomere kao i autonomno replicirajuće sekvence koje su ključne za replikaciju i stabilnost. YAC također treba nositi selektivni marker ili biljege i mjesta restrikcije kako bi ga učinio učinkovitim vektorom kloniranja. Veliki slijed u rasponu od 1000 kb do 2000 kb može se umetnuti u YAC i prenijeti u kvas. Učinkovitost transformacije YAC vrlo je mala.
Slika 01: YAC Vector
Bakterijski umjetni kromosom (BAC) je umjetno izgrađeni kromosom za molekularno kloniranje. Ima posebne regije od E coli F plazmid je kružnog i super namotanog. BAC je razvijen za kloniranje fragmenata DNK u bakterije, posebno u E coli. Može podnijeti fragmente DNK veličine do 300 kb. U usporedbi s YAC-om, umeci za kloniranje BAC-a su manjih dimenzija. BAC-ovi su razvijeni 1992. godine i još je uvijek popularan zbog svoje stabilnosti i lakoće gradnje. BAC su korisni i u razvoju cjepiva.
Slika 02: BAC vektor u molekularnom kloniranju
YAC vs BAC Vektori | |
YAC je genetski inženjerski kromosom koji koristi DNK kvasca u svrhu kloniranja. | BAC je upotreba genetički zasnovane molekule DNK E coli DNK u svrhu kloniranja. |
rod | |
YAC-ovi su dizajnirani za kloniranje velikih fragmenata genomske DNK u kvasce. | BAC-ovi su razvijeni za kloniranje velikih genskih fragmenata u Escherichia coli. |
Umetnite duljinu | |
YAC-ovi mogu sadržavati genske umetke veličine megabaze (1000 kb - 2000 kb). | BAC-ovi mogu nositi umetke od 200-300 kb ili manje. |
izgradnja | |
YAC DNA je teško očistiti netaknutom i zahtijeva visoku koncentraciju za generiranje YAC vektorskog sustava. | BAC je lako netaknut netaknut i lako se može konstruirati. |
himerizam | |
YAC-ovi su često himerni. | BAC-ovi su rijetko himerni. |
Stabilnost | |
YAC je nestabilan. | BAC je stabilan. |
izmjene | |
Rekombinacija kvasca vrlo je izvediva i uvijek ostaje aktivna. Stoga može generirati brisanja i druga preuređenja u YAC-u. | E coli rekombinacija je spriječena i uključuje se po potrebi. Dakle, smanjuje neželjene preinake u BAC-ovima. |
Održavanje | |
Manipuliranje rekombinantnih YAC-a obično zahtijeva prebacivanje u YAC E coli za naknadne manipulacije. Dakle, to je mukotrpan proces. | Promjena BAC-a događa se izravno u E coli. Dakle, nema potrebe za prijenosom DNA. Dakle, postupak nije naporan. |
YAC je postao ključno istraživačko sredstvo u procesima kloniranja zbog svoje sposobnosti kloniranja velikih fragmenata DNK u organizam domaćina. Međutim, YAC-ovi imaju nekoliko nedostataka poput vektora kao što su građevinske poteškoće, himerizam, nestabilnost itd. Stoga su za prevazilaženje tih problema znanstvenici razvili BAC vektore. BAC je izgrađen pomoću određenih regija u E coli kromosom. To je stabilan vektor i lako se može konstruirati. Međutim, duljina DNA s kojom se BAC može nositi je i do 20 puta manja od one koju ima YAC. To je razlika između vektorskih sustava YAC i BAC. Danas je BAC poželjniji od YAC-a u laboratorijima.
Reference
1. Shero, J. H., M. K. McCormick, S. E. Antonarakis i P. Hieter. "Vektorski umjetni kromosom kvasca za učinkovitu manipulaciju i mapiranje klonom." Genomics.U.S. Nacionalna medicinska knjižnica, lipanj 1991. Web. 25. ožujka 2017
2. Ramsay, M. „Kloniranje umjetnog kromosoma kvasca.“ Molekularna biotehnologija. Američka nacionalna medicinska knjižnica, travanj 1994. Web. 25. ožujka 2017
Ljubaznošću slike:
1. “BAC-ovi za kloniranje vektora Chem114A” Tinastella - (CC BY-SA 3.0) preko Commons Wikimedia