Razlika između RT-PCR i QPCR

Lančana reakcija reverzne transkripcije polimerazom (RT-PCR)

RT-PCR u odnosu na QPCR

Napredak biotehnologije rezultirao je otkrivanjem nekoliko načina kako se nositi sa zahtjevima za transplantacijom organa tijekom godina. Prije toga, osoba koja bi dobrovoljno donirala bilo koji organ odmah nakon smrti bolesniku u potrebi, mogla je samo započeti operaciju transplantacije. Neprekidne studije i istraživanja biologa dovode do otkrića matičnih stanica.

Matične stanice odnose se na one uzete iz DNK embrija, koji će služiti kao izvor za regeneraciju stanica, a koji bi u osnovi bio klon organa iz kojeg je pronađena DNK. Iako aktivisti za ljudska prava lobiraju za zaustavljanje takvih postupaka, uspješne operacije doista su dokazale učinkovitost razvoja matičnih stanica u transplantaciji organa.

No, prije nego što se može shvatiti i u potpunosti razumjeti matične stanice, potrebno je upoznati se s različitim terminologijama povezanim s ovim znanstvenim otkrićem. Uzgojem matičnih stanica bavi se DNK i njegovo kodiranje. Dakle, za studente ili bilo koje osobe zainteresirane za to područje najvažnije je razlikovati RT-PCR i qPCR.

Lančana reakcija reverzne transkripcije polimerazom (RT-PCR) jedna je od mnogih inačica lančane reakcije polimeraze, ili PCR. Ova se laboratorijska tehnika naširoko koristi u molekularnoj biologiji kako bi znanstvenici proizveli višestruke kopije određenog niza DNA postupkom koji je skovan kao "pojačavanje". Razlika između RT-PCR i tradicionalnog PCR je ta što se RNA najprije preobražava natrag u svoj DNA komplement, koji koristi reverznu transkriptazu. Nova komplementarna DNA koja sadrži obrnutu transkripciju tada će se amplificirati korištenjem tradicionalnog PCR-a ili PCR-a u stvarnom vremenu..

Većina studenata koji proučavaju ovaj postupak često čine pogrešku u izmjeni PCR-a obrnute transkripcije i PCR-a u stvarnom vremenu, jer su dvije kratice slično. Da ne bi došlo do zabune, biolozi označavaju PCR u stvarnom vremenu kao kvantitativni PCR u stvarnom vremenu ili qPCR.

QPCR se uvelike razlikuje od RT-PCR-a, jer je qPCR odgovoran za mjerenje pojačanja dok se događa. Može se reći da RT-PCR pokreće proces amplifikacije, dok qPCR mjeri kako se postupak odvija.

Kvantitativni PCR u stvarnom vremenu

QPCR je zapravo revolucionirao tradicionalni način jednosmjernog pristupa kada je u pitanju kvantificiranje DNK i RNA, jer primjena qPCR metode omogućava biolozima da utvrde početnu koncentraciju nukleinske kiseline, čak i prije nego što se primijete rezultati reakcije i zapisao dolje.

Primjena qPCR-a, koji se danas smatra najmoćnijom i osjetljivijom tehnikom analize za genetičke studije, značajno se proširio. Trenutno sudjeluje u kvantitativnoj analizi ekspresije gena, genotipizaciji, detekciji patogena i analizi SNP-a, zajedno s mjerenjima RNA interferencije..

QPCR se često kombinira s postupkom obrnute transkripcije za kvantificiranje glasnika RNA i MicroRNA prisutnih u stanicama tkiva promatranim i s kojima je eksperimentirano. To tada daje još jednu vidljivu razliku između to dvoje: RT-PCR se može koristiti za proces amplifikacije, ali treba ga spojiti s qPCR-om za potrebe kvantifikacije..

Također se zna da je QPCR kvantitativniji, jer se podaci mogu prikupljati kako faza eksponencijalnog rasta (log) PCR-a napreduje. Biolozi primjećuju da je količina nusprodukta PCR-a izravno proporcionalna količini nukleinske kiseline predloške koja će se mjeriti qPCR-om.

S druge strane, RT-PCR daleko je od kvantitativne prirode, jer promatranje intenziteta pojačanog pojasa na gelu nakon postavljenog standarda koncentracije može dovesti do "polukvantitativnog" zaključka.

Sažetak:

1.QPCR i RT-PCR su oba termina koja se koriste u biotehnologiji i koriste se za proizvodnju višestrukih kopija DNK.
2.RT-PCR se koristi za pojačavanje obrnute transkripcije DNA koda; QPCR mjeri pojačanje.
3.RT-PCR je za pojačavanje, dok je qPCR za kvantifikaciju.
4.QPCR je kvantitativnog karaktera, dok RT-PCR nije.