Razlika između nitroceluloze i PVDF
Share
Ključna razlika - Nitroceluloza i PVDF
Western blotting je metoda koja omogućava otkrivanje i kvantificiranje specifičnih proteina iz uzorka proteina. Pouzdanost tehnike ovisi o odabiru ispravne membrane za apsorpciju proteina iz gela. Postoje različite vrste mikroporoznih membrana. Nitrocelulozne i PVDF membrane su dvije takve membrane koje preferiraju istraživači zbog svojih osobina u odnosu na ostale vrste membrana. Odabir između nitroceluloze ili PVDF-a također je još jedan izazov u zapadnom pjevanju. I nitroceluloza i PVDF imaju visoku sposobnost apsorpcije proteina. Ključna razlika između nitroceluloze i PVDF membrane je u tome membrane nitroceluloze nemaju sposobnost uklanjanja antitijela i ponovnu uporabu membrane za ponovno postavljanje antitijela dok PVDF membrane imaju sposobnost skidanja i ponovne upotrebe.
SADRŽAJ
1. Pregled i ključne razlike
2. Što je nitroceluloza
3. Što je PVDF
4. Usporedna usporedba - Nitroceluloza i PVDF
5. Sažetak
Što je nitroceluloza?
Nitroceluloza je polimer proizveden tretiranjem celuloze dušičnom kiselinom, a koristi se za izradu mikroporoznih membrana u molekularnoj biologiji, posebno za blotting tehnikama poput južnog, sjevernog i zapadnog upijanja. Veličine pora nitroceluloznih membrana kreću se od 3 do 20 um. Mikroporozne membrane nitroceluloze olakšavaju otkrivanje imunokemijske reakcije koja se događa na površini membrane. Stoga se nitrocelulozne membrane često koriste za imobilizaciju proteina i detekciju specifičnih proteina u zapadnom upijanju. Membrane nitroceluloze također mogu imobilizirati glikoproteine i nukleinske kiseline.
Nitrocelulozne membrane se preferiraju u ispitivanjima bočnog protoka zbog nekoliko svojstava. Membrane nitroceluloze apsorbiraju proteine u visokoj koncentraciji. Otapalo koje se koristi za vlaženje membrane ne smanjuje apsorpciju proteina nitrocelulozne membrane. Nitrocelulozne membrane mogu se lako smanjiti na željenu veličinu gela i prenijeti bjelančevine iz gela u membranu električnim ili kapilarnim prijenosom. Nitroceluloza omogućava brži protok proteina kroz membranu s visokim potencijalom vezanja. Nitroceluloza pokazuje poboljšanu snagu rukovanja. Sljedeća posebna osobina nitrocelulozne membrane je ta što se ona lako može zalijepiti pomoću ljepila otpornih na vodu bez otapala na razne plastične podloge.
Slika 01: Nitrocelulozna membrana za Western blot
Što je PVDF?
Poliviniliden difluorid (PVDF) je fluoropolimer proizveden polimerizacijom viniliden difluorida i ima visoku sposobnost imobilizacije proteina. Zbog toga se mikroporozne membrane dobivene iz PVDF koriste u tehnici zapadnog blotiranja za analizu specifičnih proteina iz smjese proteina. PVDF membrane se također mogu koristiti za analizu aminokiselina i sekvenciranje proteina. Najvažnija karakteristika PVDF membrane preko nitrocelulozne membrane je ta da se ona mogu lako ukloniti protutijela i ponovo upotrijebiti za naknadne sonde antitijela.
Membrane PVDF su deblje od nitroceluloznih membrana; prema tome, otporniji je na oštećenja tijekom ponovne uporabe. Membrane PVDF su visoko hidrofobne. Stoga se prije upotrebe moraju namočiti u metanolu ili izopropanolu.
Koja je razlika između nitroceluloze i PVDF?
Nitroceluloza vs PVDF | |
| Nitroceluloza je polimer sastavljen od celuloze. | PVDF je fluoropolimer proizveden polimerizacijom viniliden-difluorida. |
| Veličina pora membrane | |
| Tipične veličine pora su 0,1, 0,2 ili 0,45 μ | Tipične veličine pora su 0,1, 0,2 ili 0,45 μm |
| Kapacitet vezivanja proteina | |
| Nitroceluloza ima sposobnost vezanja proteina od 80 do 100 µg / cm2. | PVDF ima kapacitet vezanja proteina od 170 do 200 µg / cm2. |
| Osjetljivost | |
| Ovo ima malu osjetljivost u usporedbi s PVDF-om. | Ovo ima visoku osjetljivost. |
| Otkrivanje slabo eksprimiranih proteina | |
| Budući da je osjetljivost na nitrocelulozne membrane niska, nije pogodna za otkrivanje slabo eksprimiranih proteina. | Ovo je pogodnije za otkrivanje slabo eksprimiranih proteina zbog velike osjetljivosti. |
| Pozadinska buka | |
| Ovo ima niži pozadinski šum | Zbog toga je veća pozadinska buka. |
| Interakcije s proteinima | |
| Proteinske molekule vežu se na nitrocelulozne membrane pomoću hidrofobnih interakcija. | Proteini se vežu na PVDF membrane kroz hidrofobne i dipolne interakcije. |
| Priroda membrane | |
| Nitroceluloza je krhka i krhka. No dostupne su verzije nitroceluloze i otporne su na njih. | PVDF je trajniji i ima veću kemijsku otpornost. |
| Sposobnost uklanjanja i ponovne upotrebe | |
| Nitroceluloza može imati poteškoća u skidanju i popravljanju bez gubitka signala. | PVDF je idealan za ispitivanje i redoslijed aplikacija. |
| Pogodnost | |
| Nitroceluloza je idealna za otkrivanje proteina male molekulske mase. | PVDF je pogodniji za otkrivanje proteina veće molekulske mase. |
| Ostale uporabe | |
| Nitroceluloza se može upotrijebiti za analizu nukleinske kiseline i mrlju u točkama / utorima. | PVDF se može koristiti za sekvenciranje proteina i sustave ispitivanja na čvrstoj fazi. |
| cijena | |
| Ovo je jeftinije od membrana PVDF. | Ovo je skuplje od nitroceluloznih membrana. |
| Potreba za predvlaženjem | |
| Membrane nitroceluloze ne zahtijevaju prethodno natapanje metanolom | Membrane PVDF zahtijevaju prethodno natapanje metanolom. |
Sažetak - Nitroceluloza i PVDF
Nitrocelulozne membrane bile su prve membrane koje su komercijalno korištene za ispitivanje bočnog protoka. Imaju visok kapacitet apsorpcije proteina. Stoga se nitrocelulozne membrane koriste u zapadnom upijanju. PVDF je druga vrsta membrane koja se koristi u Western blotingu i ona također ima visoku sposobnost apsorpcije proteina. Obe se vrste koriste u western blotu za analizu proteina. Međutim, PVDF membrane imaju više posebnih atributa, što ih čini pogodnijim od nitroceluloznih membrana za zapadno začepljenje. No, nitrocelulozne membrane su prikladnije za otkrivanje proteina niske molekulske težine, a PVDF membrane su prikladnije za otkrivanje visoko molekularnih težinskih proteina. To je razlika između nitrocelulozne i PVDF membrane.
Ljubaznošću slike:
1. "Western blot transfer" napisao Bensaccount na engleskoj Wikipediji (CC BY 3.0) putem Commons Wikimedia
Referenca:
1.Luque-Garcia, Jose L., Ge Zhou, Tung-Tien Sun i Thomas A. Neubert. "Upotreba nitroceluloznih membrana za karakterizaciju proteina laserskom desorpcijom / ionizacijskom masnom spektrometrijom potpomognutom matriksom." Analitička kemija. Američka nacionalna medicinska knjižnica, 15. srpnja 2006. Web. 28. ožujka 2017
2. "Molekularni biljezi i biljna biotehnologija." Google knjige. N.p., n.d. Mreža. 28. ožujka 2017
3.Monday, 8. travnja 2013. Tweet. "Čarobnjaci u membrani: mudro birajte za najbolje rezultate rezultata Western Western Blot." Biocompare. N.p., 08. travnja 2013. Web. 28. ožujka 2017
