Razlika između PCR i PCR u stvarnom vremenu

PCR vs PCR u stvarnom vremenu

Linijska reakcija PCR ili polimeraza revolucionarno je otkriće u modernoj molekularnoj biologiji, što ju je prvi put razvio kemičar Kary Mullis 1983. To omogućava da se za analizu pojača jedan slijed složene DNK. Osnovna ideja PCR-a je da su dva prajmera, koja su komplementarna suprotnim lancima DNK sekvence, usmjerena jedna prema drugoj; Primeri proizvode komplementarne niti, a svaka sadrži drugi primer. Dakle, rezultat je velika količina sekvence koja odgovara DNK koja leži između dvaju prajmera. Enzim DNA polimeraza koristi se za produljenje prajmera u PCR-u. DNA polimeraza je termostabilni enzim i ima sposobnost preživljavanja na visokim temperaturama (od 94 do 95 ° C) koja se koristi za denaturaciju predloške DNA.

PCR uključuje tri koraka, naime, ponovljene krugove denaturacije, žarenje primera i sintezu DNK. Za provođenje ove reakcije koristi se termociklički stroj koji može biti programiran tako da brzo i točno mijenja temperature. Primjene PCR-a su kriminalističko istraživanje, otisak prsta DNK, otkrivanje patogena i analiza DNK ranih ljudskih vrsta.

Što je konvencionalna PCR?

Postoje tri glavna stadija konvencionalne PCR, naime; Stadij amplifikacije DNA, odvajanje PCR-a i otkrivanje produkata. Odvajanje segmenata DNA obično se vrši elektroforezom agaroznog gela. Proizvodi se zatim oboje s etheiduim-bromidom. Konačno, otkrivanje se postiže vizualizacijom bendova na gelove pod UV svjetlom. Stoga se konačni rezultati uobičajenog PCR-a ne izražavaju u brojevima. Obično PCR može otkriti samo jedan parametar.

Što je PCR u stvarnom vremenu?

PCR u stvarnom vremenu može otkriti pojačavanje proizvoda jer se proizvodi sintetiziraju. Razvojem tehnologije PCR je postao vrlo popularna tehnika, posebno za otkrivanje i identifikaciju bakterija u namirnicama. PCR u stvarnom vremenu koristi sustav florescentne boje i termocikler opremljen fluorescentnom detekcijom.

Koja je razlika između konvencionalnog PCR-a i PCR-a u stvarnom vremenu?

• Konvencionalna PCR zahtijeva više vremena jer koristi elektroforezu gela za analizu pojačanih PCR proizvoda. Suprotno tome, PCR u stvarnom vremenu zahtijeva manje vremena jer može otkriti pojačanja tijekom ranih faza reakcije..

• PCR u stvarnom vremenu prikuplja podatke u fazi eksponencijalnog rasta PCR-a, dok tradicionalni PCR prikuplja podatke u Krajnjoj točki reakcije.

• Rezultati krajnje točke konvencionalnog PCR-a možda nisu vrlo precizni, ali rezultati PCR-a u stvarnom vremenu su vrlo precizni.

• Real-time PCR je osjetljiviji od klasičnog PCR-a.

• Konvencionalni PCR ima vrlo slabu razlučivost, dok PCR u stvarnom vremenu može otkriti vrlo malo promjena zbog visoke rezolucije.

• Detekcija krajnje točke konvencionalnog PCR ima kratak dinamički raspon, dok detekcija PCR u stvarnom vremenu ima širok dinamički raspon.

• Za razliku od klasičnog PCR-a, automatizirane tehnike otkrivanja nalaze se u PCR-u u stvarnom vremenu.

• Konvencionalni PCR je visoko sofisticiran i puno intenzivniji od PCR-a u stvarnom vremenu.

• Za razliku od PCR-a u stvarnom vremenu, konvencionalni PCR ne može razlikovati mrtve i žive bakterije.

• PCR u stvarnom vremenu koristi fluorescentni sustav boja za otkrivanje proizvoda dok konvencionalni PCR koristi etidijum bromid i UV svjetlo za vizualizaciju traka u mediju od agaroze.